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本制品是一种可消化各种组织中细胞外基质，保留细胞表面受体完整性，以实现高效分离各种细胞的试剂。经本制品分离后的细胞悬液可用于各种组织相关研究中的类器官或原代细胞培养、细胞分选、单细胞测序等实验，尤其适用于肿瘤组织的消化。本制品为百奥莱博BalbOrganoid类器官培养液系列产品的配套试剂。

类器官(Organoid)通常指在体外显示出与体内器官或组织相似结构和功能的复杂三维(3D)结构，更严格的定义是指由干细胞或器官祖细胞发育而来的，作为体外平台模拟其对应器官的结构和功能等多个方面的3D细胞培养物。类器官在形成过程中，细胞自我组建并分化为功能型的微小细胞团，模拟真实器官发育，以与体内相似的方式由细胞分序与空间特异性的谱系分化调控，需激活由细胞内在成分和外在环境(细胞外基质、培养液等)介导的各种信号通路。

• 性质温和，可有效避免细胞损伤：本制品在尽可能地保留细胞表面受体的完整性，减少细胞损伤的情况下，将组织分散为寡细胞团或单细胞悬液。对于肿瘤组织，本制品可实现高效分离肿瘤细胞、间质细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞等。
  
• 使用简单：进行消化组织时，只需要剪碎组织后加入本制品，经孵育、过滤和离心等几个步骤即可，整个过程不需要复杂的仪器和操作，约1小时即可完成组织的消化。
  
• 可降低污染风险：本制品中组织消化液基础培养液含优化比例的抗生素，可降低组织消化过程中的污染风险。

按照组织消化液基础培养液与组织消化液添加剂20:1的比例配制组织消化液，本制品小包装可配制约100mL组织消化液。按照1g组织使用10mL组织消化液，本制品小包装可消化10g组织。

• 收到产品后，组织消化液添加剂一旦解冻，请立即使用或分装后置于-20℃保存。再次解冻时，请立即使用，不可再次冷冻。如因冻融出现沉淀物，则不可继续使用，以免造成更大损失。
  
• 需自备PBS、胎牛血清、70μm或100μm细胞过滤器、15mL离心管等。
  
• 使用时需注意无菌操作，避免污染。

• 组织消化液的配制。
  
  • 将组织消化液添加剂从-20℃取出，置于冰上或4℃进行解冻。
    
  • 按照组织消化液基础培养液：组织消化液添加剂=20:1的比例配制组织消化液。例如配制105mL的组织消化液，取5mL组织消化液添加剂加入100mL组织消化液基础培养液中，混匀即得105mL组织消化液。
• 组织的消化(本步骤以消化1g组织样本为例)。
  
  • 按组织样本：组织消化液=1:10的比例取适量组织消化液置于新的无菌离心管中备用。例如1g组织需10mL组织消化液进行消化。
    
  • 取组织样本，PBS洗涤组织2次。
    
  • 在培养皿中，使用手术剪刀或手术刀将组织处理为<1mm³的组织块，并将组织块转移至15mL无菌离心管中。
    
  • 向离心管中加入10mL组织消化液，置于37℃消化0.5～1小时。期间需严格监控消化过程，每隔15分钟使用10mL移液管上下吹打混匀10～20次，当大多数组织块可以顺利通过1mL吸头时，则组织消化完成。
    
    • 组织消化时间因样本而异，对于消化困难的样本可适当延长孵育时间至1.5小时。
  • 当达到组织消化终点时，向组织消化液中加入0.5mL FBS进行终止，即终止时FBS的终浓度为5%。
    
  • 终止消化后，使用70～100μm细胞过滤器对组织消化液进行过滤。
    
  • 将过滤后的细胞以300×g室温离心3分钟。如见红色沉淀物，则去除上清，加入2mL红细胞裂解液在室温下孵育3～5分钟裂解红细胞。然后以300×g再次室温离心3分钟。
    
  • 去除上清，用5mL相应的类器官基础培养液重悬细胞，300×g室温离心3分钟，重复本步骤2次。
    
  • 按照每孔5000～15000个细胞的用量制备单细胞悬液，也可根据具体实验设计使用相应的培养液或缓冲液重悬沉淀，制成细胞悬液。